М И Н И СТ Е РСТ ВО О БРА ЗО В АН ИЯ РО ССИ ЙСКОЙ Ф Е Д Е РА Ц ИИ
В О РО Н Е Ж СКИЙ ГО СУД А РСТ В Е НН ЫЙ УН И В Е РСИ Т ЕТ
Са
нита
и микробиол ические методы иссл
рно-ба
ог
Пра
ктическое пособие для студентов
Специаьность «Ф а ция» (011600)
л
рма
ктериол ический контроль
а
ог
едовния
В оронеж
2003
Стр.1
3
С О ДЕР Ж А Н ИЕ
В В Е
ДЕН ИЕ
…………………………………………………………………… 3
Т ема 1. М И КРО БИ О Л О ГИ Ч Е СК ИЕ Л А БО РА Т О РИИ И ИХ
О БО РУД О В АН И Е…………………………………………………………… ..4
Т ема 2. М И КРО БИ О Л О ГИ Ч Е СК ИЕ М Е Т О ДЫ И ССЛ Е Д О В АН ИЯ
М О РФ О Л О ГИИ М И К РОО РГАН И ЗМ О В …………………………………… 9
Т ема 3. М И К РО БИ О Л О ГИ ЧЕ СК ИЕ М Е Т О ДЫ И ССЛ Е Д О В АН И Я…… ..17
Т ема 4. М Е Т О ДЫ В Ы Д Е Л Е Н ИЯ, К УЛ ЬТ И В И РО В АН ИЯ И
И Д Е Н Т И Ф И К А Ц ИИ ЧИ СТЫХ КУЛ ЬТ УР БА К Т Е РИ Й………………… ..23
Т ема 4.1. ПО Л УЧЕ Н ИЕ ЧИ СТЫХ КУЛ ЬТ УР БА К Т Е РИ Й……… ...23
Т ема 4.2. И Д Е Н Т И Ф И К А Ц ИЯ КУЛ ЬТ УР БА К Т Е РИ Й…………… .24
Т ема 5. М Е Т О ДЫ И ЗУЧ Е Н ИЯ АН Т И М И КРО БН О ГО Д Е ЙСТ В ИЯ
АН Т И БИ О Т И К О В …………………………………………………………… 31
Т ема 6. М И КРО БИ О Л О ГИ Ч Е СКИЙ К О Н Т РО ЛЬ АН Т И СЕ ПТ И К ОВ ,
Д Е ЗИ Н Ф Е К Т АН Т ОВ , М Е Т О Д ОВ СТ Е РИ Л И ЗА Ц ИИ ………… .…… ..… ..35
Т ема 6.1. СТ Е РИ Л И ЗА Ц И Я………………………………………… ...35
Т ема 6.2. Д Е ЗИ Н Ф Е К Ц И Я………………………………… … ……… .37
Т ема 6.3. АСЕ ПТ И КА И АН Т И СЕ ПТ И К А………………………… ..38
Т ема 7. САН И Т А РНАЯ М И КРО БИ О Л О ГИ Я………………… ...………… 40
Т ема 7.1. М И КРО Ф Л О РА В О Д Ы … ………………………………… ..43
Т ема 7.2. М И КРО Ф Л О РА В О ЗД УХ А…………………… ..………… 48
Т ема 7.3. М И К РО Ф Л О РА ПО ЧВ Ы ……………………………… ...… 50
Т ема 7.4. М И КРО БИ О Л О ГИ Ч Е СКИЙ К О Н Т РО ЛЬ В А ПТ Е К АХ ...52
Т ема 8. М Е Т О ДЫ В Ы Я В Л Е Н ИЯ И Т И Т РО В АН ИЯ СПЕ Ц И Ф И ЧЕ СК ИХ
АН Т И Т ЕЛ (СЕ РО Д И А ГН О СТ И КА )……………………………………… ..55
О С Н О В Н АЯ Л И ТЕР А Т У РА…………………………………… … ……… .62
Стр.3
6
обезза ж ива
п редметов ра
ра
ра
ктериол
8. При в
ога.
нию зарязненного па енным ма
бочего инв ря, ра
г
ента
поп ал за зный ма
ба
ыпол
нении ба
ог
чистотой рук: по оконча
дезинфекции; ра
дезинфицирова
п ира
9. Ра
ва
мог
кцина
ут в
oг
необ ходимые для даьнейш ей ра
за
ю щ ийся рефриж ера
ботники ба
ог
бочее место в конце дня п рив
ть, а за зный ма
л
нии ра
ра
ции п ротив тех инфекционных бол
стретиться в иссл
ктериол ических лбора
едуемых об ъ ектах.
тор или сейф.
а
eниями (ocв
eтитeль,
ф aзoв
тог
териал, осу щ ествяю тся в п рисутств
ктериол ических ра
бочего места и ча
л
боты с за зным ма
ра
боты, стаить на хра
торий подл
териал и кул
в
езней, в
Oбopyд oвaниe микpoбиoл oгичecкиx л aбopaт opий
Л aб opaтopии cнaбж eны cл
тepмocтaтaми, aпп apaтypoй для cтepил
п oл
yчения диcтил
aннoй в
тexничecкими и aнaл
(фил
итичecкими в
инcтpyмeнтoв (б aктepиoл ичecкиe п eтли. шп aтeли, иг
л
ьтp Зeйтцa и дp.), в
oг
cкиe и г
п peп apaтoв, гдe нaxoдятcя pacтв
киcл
г
aзoв
oты, фил
oй г
pacтв
aб opaтopии в
aл
ьтpoв ьнaя б yмaг
opoм. Д ля п oв
нeoб xoдимыми п итaтeл
Д ля выpaщ ив
микpoopг
aб opaтopнoй п ocyдoй (п poбиpки, кoл
aмп yлы, п acтepoв
B л
paдyиpoв
ыдeл
aнныe nип eтки) и дp.
eнo мecтo для oкpacки микpocкoп ичecкиx
opы cп eциaл
ьныx кpacитeл
opeлкoй или cпиpтoвкoй и б aнкoй c дeзинфициpyю щ им
ceднeвнoй paб oты л
aг
диaгнocтичecкими п peп apaтaми и дpyг
кpyп ныx л
выpaщ ив
п ocyды и дpyгиx цeл
ьными cpeдaми, xимичecкими peaктив
ими л
aб opaтopияx имeютcя тepмocтaтныe кoмнaты для мaccoв ooг
aния микpoоpг
aния, xpaнeния кyл
eй иcп oл
aнизмoв, п ocтaнoв
ьзyeтcя cл
2. Ламина р бо кс. С помощ ью боксов (на
физические ба
ра
с инфекционным ма
3. Xoл oд иль
xpaнeния кyл
cыв
териаом.
л
ники. И cп oл
opoтoк и п poчиx биoл ичecки aктив
ьтyp микpoopг
oг
aб opaтopными мaтepиaл
ки cepoл ичecкиx peaкций.
eдyющ aя aпп apaтypa:
oг
ьтyp, cтepил
aнизмoв 37 °C. Tepмocтaты быв
рьеры для п редотв щ ения в
изaции л
1. Tepмocт aт . Aпп apaт, в кoтopoм п oддepж ив
тeмп epaтypa. Oптимaл
стол
а
oздyш ными и в
ьных, лмина
aб opaтopнoй
aeтcя п ocтoяннaя
ьнaя тeмп epaтypa для paзмнoж eния мнoгиx
aют в
oдяными.
ьзyютcя в микpoбиoл ичecкиx л
aнизмoв, п итaтeл
озмож ных конта
oг
рных) созда
ктов персона
ьныx cpeд, кpoви, в
ют
ла
aб opaтopияx для
aкцин,
ныx п peп apaтoв п pи темп epaтypе
a и дp. Kaждoe paб oчee мecтo cнaбж eнo
aб opaтopия дoл
eй, cпиpт,
жнa pacп oл aть
aми,
aми. B
ьный кoндeнcop и дp.), л
лиpoв
териаом плтья,
стей тела, на которые
ии в чара -
л
бот ну ж но строго сл
л
а
едить за
одить в порядок и тщ а ьно
ьту ры микробов,
нение в
териаом п одв аергть их
тел
еж ат обяза ьной
озбудители которых
тел
биoл ичecкими иммepcиoнными микpocкoп aми c дoп oл
п pиcп ocoбл
тeмнoп oл
o-кoнтpacтнoe
л
oдяными б aнями, xoл
eдyю щ ими п pиб opaми и aпп apaтaми:
нитeл
ycтpoйcтв
ьтpoв
ьными
o,
ю минecцeнтным микpocкoп oм,
изaцни, pH-мeтpaми, aпп apaтoм для
oды (диcтилятop), цeнтpифyraми,
ecaми, aпп apaтypoй для фил
oдил
aния
бы, чaш ки Пeтpи, мaтpaцы, фл
ьникaми, нaб opoм
лы, п инцeты и дp.),
aкoны.
Стр.6
7
oкoл
xoл
oдил
o 4°C. Д ля xpaнeния п peп apaтoв иcп oл
ьники, в кoтopыx п oддepж ив
eтoк, для paздeл
(эмyльcии, cycп eнзии). B л
paзл
5. Cyшил ьнo-cт epил из
в
п apoм п oд дaвл
aвтoкл
озду ш ной стерил ции лбора
6. Cт epил из
ичными peж имaми paб oты.
иза
aвы paзныx мoдeл
oг
oг
ьзyютcя низкoтeмп epaтypныe
4. Цeнт pифyги. Пpимeняютcя для ocaждeния микpoopг
эpитpoцитoв и дpyгиx кл
aб opaтopияx иcп oл
aт op пapoвoй (aвт oкл aв). Пpeднaзнaчeн для cтepил
eниeм. B микpoбиoл ичecкиx л
eй (в
торной посуды и друг
oг
ьныe, г
eдoв
aний иcп oл
aб opaтopияx иcп oл
epтикaл
ичecкиx иccл
микpocкoп oв (биoл ичecкий, л
cп eциaл
дpyгиx п pизнaкoв paзл
мeнee 0,2-0,3 мкм. Пpeдeл
eл
opизoнтaл
п epeнocныe).
Mикpocкoпы и микpocкoпичecкaя т exникa
Д ля микpобиoл
ьныe мeтoды микpocкoп ии (фaзoв
ьзyют нecкoл
ю минecцeнтный, эл
их ма
aeтcя тeмп epaтypa - 20 °C и ниж e.
eния нeoднopoдныx ж идкocтeй
aциoнный шкaф (пeчь П acт epa). Пpeдна чен для
а
ьзyют цeнтpифyги c
зна
териаов.
л
изaции
ьзyютcя
ьныe, cтaциoнapныe,
ькo тип oв
Oни п peднaзнaчeны для изyчeния ф opмы, cтpyктypы, paзмepoв и
ичныx микpoopг
микpocкoп a - 0,2 мкм. Oбщ ee yв ичeниe микpocкoп a oп peдeляeтcя
п poизв
eл
ьнaя paзpeш aющ aя cп ocoбнocть иммepcиoннoг
eл
eдeниeм yв ичeния oбъ eктив
ocнoв
зв
eнии дифpaкции cв
eл
yв ичeниe микpocкoп a c иммepcиoнным oбъ eктив
cocтaв
eтa п pи cил
в eш eнныx в ж идкocти мeл
дocтиг
п pиcп ocoбл
eтл
eниe дaeт в
зaмeняют oбычный кoндeнcop в биoл ичecкoм микpocкoп e.
Ф aз
aeтcя c п oмoщ ью п apaб oл
oвo-кoнт pacтнaя
микpocкoпия.
oзмoжнocть yв
aют тeмнoe изoб paж eниe oбъ eктa в cв oм п oл
- cв oe изoб paж eниe oбъ eктa нa тeмнoм фoнe.
aтивнoй. Пoзитив
eтл
явл
в
cв
eнии ф oтoл
Ф oтoл
ocв
eщ aть л
кpacнoг
цв
л
л
oзникaющ ee п ocл oздeйcтв
eтoвыx,
эл
ю минecцeнция - л
o, opaнж eв o, ж eлтoг
ю минecциpyющ eг
o в
eктpoнныx л
ия нa ниx кaкиx-л
yчeй,
eнoг
o цв
oл
ляeт: 90x10=900 кpaт.
Teмнoпoл ьнaя микpocкoпия. Mикpocкoп ия в тeмнoм п oл
aнa нa явл
ьнoм б oкoв
Ф aзoв
a нa yв ичeниe oкyляpa. Haп pимep,
oм 90 и oкyляpoм 10
oм ocв
e зpeния
eщ eнии
ьчaйшиx чacтиц (эффeкт Tиндaля). Эффeкт
oид- или кapдиoид-кoвдeнcopa, кoтopыe
oг
o-кoнтpacтнoe
oбъ eкты. Oни п pиoб peтaют выcoкyю кoнтpacтнocть изoб paж eния, кoтоpaя
мoж eт быть п oзитивнoй или нeг
нaзыв
идeть в микpocкoп п poзpaчныe
ным ф aзoв
e зpeния, нeг
Л ю минecцeнция - cв
иoнизиpyющ eг
л
зaвиcит oт физикo-xимичecкoй cтpyктypы
eщ ecтв
a. Пepв
инa в ны изл
ичнaя (coб cтв
eннaя) л
ым кoнтpacтoм
aтив
ным
Люминecцeнтнaя (или флюopecцeнтнaя) микpocкoпия. Ocнoв
ю минecцeнции.
e в
иб o иcтoчникoв энepг
o
eчeниe в
изл
ю минecциpyю щ ий oбъ eкт cиним cв
oг
eтнoe изoб paж eниe oбъ eктa. Д л
ю минecцeнции)
ю минecцeнция oбъ eктa п oд вияниeм cв
o или зeл
ьтaтe в
o cв
eтoм, тo oн иcп ycкaeт л
eтa. B peзyл
yчaeмoг
aнa нa
eщ ecтв,
ии:
yчeния.
eтa. Ecли
yчи
oзникaeт
eтa (цв
eт
ю минecцeнция
aнизмoв, в ичинa кoтopыx нe
o
o-кoнтpacтный, тeмнoп oл
eл
eктpoнный) и
ьный).
aнизмoв,
Стр.7
8
нaбл
(нaв
л
cл
юдaeтcя б eз п peдв
eдeннaя) - в
aть иx в иccл
apитeл
ю минecциpyю щ ими кpacитeл
ьнoг
oзникaeт п ocл
o oкpaш ив
oзмoжнocтью иccл
eдoв
e oб paб oтки п peп apaтoв cп eциaл
микpocкoп ия п o cpaвнeнию c oбычными мeтoдaми oбл
п peимyщ ecтв: в
oбнapyж ив
в
eдyeмoм мaтepиaл
eдcтвиe выcoкoй cтeп eни кoнтpacтнocти.
B л
п pимeняeтcя для в
кoтopыx л
мaкpoмoл
Cв
нм, п oзв
eтoвыe л
aб opaтopнoй п paктикe л
ыявл
микpocкoп a (0,2 мкм). Эл
виpycoв,
тoнкoг
п pи oп peдeл
o
100 000 paз мeньш e дл
cп ocoбнocть эл
oляeт п oл
cкaниpyю щиe эл
изoб paж eниe п oв
п риборов зна
«п росв
ечива
обна
ю щ ег
Эл eкт poннaя микpocкoпия. Пoзв
eж aт зa п peдeл
eния и изyчeп ия мнoгиx микpoopг
oляeт нaбл
paзл
ичныx
aть ж ивыe микpoopг
e в нeб oл
aния oбъ eктa, втopичнaя
ьными
ями - ф лю opoxpoмaми. Л ю минecцeнтнaя
aдaeт pядoм
aнизмы и
ьшиx кoнцeнтpaцияx
ю минecцeнтнaя микpocкoп ия шиpoкo
aнизмoв.
aми paзpeш aющ eй cп ocoбнocти cв oг
eктpoнный микpocкoп п pимeняeтcя для изyчeния
cтpoeния
юдaть oбъ eкты, paзмepы
етoв o
микpoopг
ины в ны в
инy в ны oкoл
идимoг
oл
o cв
eл
aнизмoв,
eкyляpныx cтpyктyp и дpyгиx cyбмикpocкoп ичecкиx oбъ eктoв.
yчи в тaкиx микpocкoп ax зaмeняeт п oтoк эл
eнныx ycкopeнияx дл
oл
eктpoнoв, имeю щ ий
eктpoннoг
yчить oбщ ee п oл
чител
Hapядy c п pиб opaми «п pocв
о» типа.
микробных компонентов (а
(токсинов и др.) л
этого микроба (на
и др.).
М а
п ромыв
л
ог
крооргнизма (кровь, г
ные в
а
П р инципы микр о био л о гиче
Ла бо раmо рная д uа гносmuка
ру ж ении в оргнизме бол
нтиг
а
слу ж ат ра ичные биол ические ж идкости и друг
ма
териаом для иссл
зл
или аутоп сии от трупа. В некоторых случа
об ъ екты окру жа
т.п .
микроскоп ический, кул
ал ический.
лерг
Мuкр о ско nuче
п рименением ра ичных в
ож ными способа
зл
М икробиол ическая дианостика в ю ча
л
оды и т.п .), и тка
ю щ ей среды: в
ог
микроскоп ических п репа тов (на ных или окра
сл
скuй ме
ра
тив
ми) из иссл
едуемого ма
оздух, в
г
ог
за ю ча
енов
o микpocкoп a, п paктичecки cocтaвяющ aя 0,1-0,2
eзнoe yв ичeниe дo l09 кpaт.
eчив
aющ eг
o» тип a иcп oл
eктpoнныe микpocкoпы, oб ecп eчив
o 0,005 нм, т. e. п oчти в
eтa. Bыcoкaя paзpeш aющ aя
л
ьзyют
aю щиe peльeфнoe
epxнocти oбъ eктa. Paзpeш aющ aя cп ocoбнocть этих
ьно ниже, чем y эл
ской д иа гно ст ики инфе
бол
ов
ьного микроба, в
езней чел ека основа
ызваш его бол
ибо изменений в пока тел омеоста
) или п роду ктов ж изнедеятел
за ях г
териа
лы, в
ектронных микроскопов
кцио нных бо л ез
в
ней
на на
езнь,
за п од действ
ьности
ием
п ример, формулы крови, биохимического состава крови
едова
ной, моча, мокрота, л ор, кал, рв
икв
оду , п ищ ев
отные ма
едова
нь, полученная методом биоп сии от ж ив
ях на иссл
ния в медицинской микробиол ииог
ие ма
ые п роду кты, смывы и
ьтураьный, биол ический, серол ический и
mод
кл ется в п риг
териа
отовении
л
идов микроскоп ической техники (св
ш енных п ростыми или
ла и их микроскоп ии с
етовая,
кл ет в себя 5 методов:
ог
зятые из
ссы,
ого
ние берут
Стр.8