Разработка и валидация методики количественного определения ротенона в гомогенате коры головного мозга крыс методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (400,00 руб.)

Первый автор	Градинарь
Авторы	Щулькин А.В., Черных И.В., Якушева Е.Н.
Страниц	7

ID	872787
Аннотация	Введение. Ротенон – нейротоксин, вызывающий повреждение дофаминергических нейронов чёрной субстанции и используемый в качестве средства для моделирования экспериментального паркинсонического синдрома. Разработка методики количественного определения ротенона в головном мозге позволит предложить и апробировать новые стратегии фармакотерапии паркинсонизма, связанные со снижением проникновения нейротоксических веществ в мозг. Цель исследования заключалась в разработке и валидации ВЭЖХ- методики ( высокоэффективная жидкостная хроматография) количественного определения ротенона в коре больших полушарий головного мозга крыс. Материал и методы. Количественное определение ротенона осуществляли с помощью хроматографической системы Stayer ( «Аквилон», Россия) с УФ- спектрофотометрическим детектором UVV 104 при длине волны 296 нм в изократическом режиме. Применяли обращенно- фазную хроматографическую колонку Luna C18 100Å ( 250* 4, 6) с зернением 5 мкм при температуре 37°С. Состав подвижной фазы: вода деионизированная, ацетонитрил в соотношении 70: 30. Определение концентрации ротенона проводили методом абсолютной калибровки по площади пиков. Пробоподготовка заключалась в гомогенизации 500 мг измельченной лобной доли коры головного мозга крыс в 500 мкл воды очищенной с последующим центрифугированием ( 1750 g) , отбором надосадочной жидкости, осаждением белка ацетонитрилом ( 2, 5 мл) . Водный слой упаривали на роторно- вакуумном испарителе. К сухому остатку добавляли 250 мкл подвижной фазы и 100 мкл инжектировали в хроматограф. Результаты. Методика была валидирована по следующим параметрам: селективность, линейность, точность, прецизионность, пределы обнаружения и определения, перенос пробы, стабильность образцов. Аналитический диапазон составил 62, 5−1000, 0 нг/ г мозга с коэффициентом корреляции более 0, 99. Предел обнаружения и количественного определения ротенона составляли соответственно 25, 0 и 62, 5 нг/ г. Расчет внутри- и межцикловой точности и прецизионности показал, что данные параметры не превышают 20% для концентрации, соответствующей нижнему пределу количественного определения, и 15% – для более высоких концентраций. Стабильность методики продемонстрирована при краткосрочном хранении в условиях комнатной температуры, трехкратном цикле заморозки- разморозки при минус 80°С, хранении при минус 80 °С в течение 60 сут. Перенос пробы отсутствовал. Ограничения исследования. Разработанная хроматографическая методика позволяет анализировать содержание ротенона в коре головного мозга крыс в диапазоне концентраций 62, 5−1000, 0 нг/ г. Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения ротенона в гомогенате коры больших полушарий головного мозга крыс.

Разработка и валидация методики количественного определения ротенона в гомогенате коры головного мозга крыс методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / М.М. Градинарь [и др.] // Токсикологический вестник .— 2023 .— №2 .— С. 120-126 .— URL: https://rucont.ru/efd/872787 (дата обращения: 14.05.2024)