1 РАЗРАБОТКА И СРАВНИТЕЛЬНАЯ АПРОБАЦИЯ МЕТОДИК ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУТАЦИИ V617F В ГЕНЕ JAK2 МЕТОДОМ ПИРОСЕКВЕНИРОВАНИЯ 1 3Красноярский филиал ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, 660036, Красноярск; 4ФГБУН «Красноярский научный центр» Сибирского отделения РАН, 660036, Красноярск Чувствительность методов, используемых для обнаружения соматической мутации V617F в гене JAK2, определяет возможности раннего выявления хронических миелопролиферативных опухолей (ХМО). <...> Мутация V617F также может быть обнаружена у лиц, не имеющих развернутой картины гематологических заболеваний, и определение мутации даже в низких концентрациях ассоциировано с повышением риска церебрального инсульта и тромбоза артериальных и венозных сосудов. <...> Цель данной работы заключалась в разработке методик, основанных на COLD-ПЦР и аллель-специфичной ПЦР, направленных на повышение чувствительности выявления мутации V617F, определяемой с помощью пиросеквенирования. <...> Аналитическую чувствительность методик оценивали на контрольных образцах с различными соотношениями аллелей. <...> Для аллель-специфичной ПЦР аналитическая чувствительность составила 0,25% мутантного аллеля при концентрации анализируемого контрольного образца 103 копий ДНК/мкл; для COLD-ПЦР — 0,5% при концентрации 104 копий ДНК/мкл. <...> Проведена сравнительная апробация методик на клиническом материале, полученном от 106 пациентов с подозрением на ХМО. <...> При исследовании клинических образцов методом COLD-ПЦР было обнаружено 13 (14%), а методом аллель-специфичной ПЦР — 15 (16%) положительных образцов. <...> Во всех 15 случаях обнаружения мутации было получено клиническое подтверждение диагноза ХМО. <...> Предложенные методики позволяют увеличить эффективность амплификации мутантной ДНК в исследуемых образцах и тем самым повысить чувствительность последующего анализа продуктов амплификации методом пиросеквенирования, что позволяет рекомендовать использование <...>