2 УДК 541.127/128 НОВЫЕ ГИБРИДНЫЕ БЕЛКИ С АКТИВНОСТЬЮ ОРГАНОФОСФАТГИДРОЛАЗЫ И ФЛУОРЕСЦЕНЦИЕЙ БЕЛКА deGFP4 Д.А. Гудков, И.В. Лягин, В.В. Верхуша*, Е.Н. Ефременко (кафедра химической энзимологии; e-mail: elena_efremenko@list.ru) Разработаны новые генетические конструкции, кодирующие синтез гибридных белков, обладающих органофосфатгидролазной активностью и свойствами аналога зеленого флуоресцентного белка с pH-чувствительной флуоресценцией. <...> Установлено, что для получения максимального выхода гибридных белков в растворимой активной форме в клетках E. сoli необходимо 0,1 мМ индуктора биосинтеза и 10 ч культивирования после индукции синтеза белков. <...> Установлено, что органофосфатгидролаза в составе гибридных белков обладает характеристиками (рН-оптимум действия, термостабильность, субстратная специфичность и каталитическая эффективность действия), отличными от соответствующих характеристик, известных для нативного фермента. <...> Показано, что флуоресценция зеленого флуоресцентного белка, находящегося в составе гибридных белков, зависит от pH среды аналогично индивидуальному белку. <...> На примере одного из гибридных белков показана взаимозависимость его флуоресцентных характеристик и OPH-активности, проявляющейся в реакциях гидролиза фосфорорганических соединений. <...> Создание высокоэффективной системы экспрессии генетической конструкции, кодирующей синтез рекомбинантной OPH, обеспечило получение фермента в больших количествах (12 мг из 1 г клеток) в клетках E. coli DH5α при 30°С и 0,2 мМ ИПТГ [4]. <...> Для выделения и очистки фермента с использованием хроматографических носителей были созданы генетические конструкции, кодирующие синтез ферментов, содержащих гексагистидиновые (His6-) последовательности на N-конце (His6-OPH) [5] или С-конце (OPHHis6) [6] молекулы белка. <...> Ферменты были успешно выделены с помощью макропористых носителей на основе полиакриламидного (ПАА) криогеля, модифицированного иминодиуксусной кислотой (ИДК) и заряженных ионами Co2 <...>