КООРДИНАЦИЯ НУКЛЕОЗИДТРИФОСФАТОВ В АКТИВНОМ ЦЕНТРЕ ТЕРМИНАЛЬНОЙ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕОТИДИЛТРАНСФЕРАЗЫ ЧЕЛОВЕКА ПРИ МАТРИЦА- НЕЗАВИСИМОМ СИНТЕЗЕ ДНК (726,00 руб.)

Первый автор	Сенчурова
Авторы	Тюгашев Т.Е., Кузнецов Н.А.
Страниц	18

ID	957454
Аннотация	Терминальная дезоксирибонуклеотидилтрансфераза человека ( TdT) – ДНК- полимераза семейства X, отвечает за повышение разнообразия иммуноглобулинов и генов T- клеточных рецепторов в процессе V( D) J- рекомбинации путем матрица- независимого присоединения случайных нуклеотидов к 3′- концу перестраиваемых сегментов V- D и J- D. Согласно рентгеноструктурным данным, координация входящего dNTP и 3′- концевых нуклеотидов одноцепочечного праймера в активном центре TdT осуществляется за счет контактов с гидрофобными ( W449, F404 и L397) и гидрофильными ( R336, H342, D395, E456, R453 и R457) остатками, формирующими dNTP- связывающий карман. При этом остатки R336, H342 и D345 принимают непосредственное участие в ориентации фосфатных групп входящего dNTP и стабилизации 3′- концевого нуклеотида ДНКпраймера. В настоящей работе был выполнен анализ последствий замены данных остатков методами молекулярной динамики и экспериментальной проверки ферментативных свойств мутантных форм TdT человека, содержащих замены R336Q, H342A и D345E. Полученные данные показали, что замена H342A вызывает увеличение константы диссоциации комплекса фермента с dNTP и ДНК- праймером и значительно уменьшает эффективность присоединения dNTP к растущей цепи. Замена D345E нарушает координацию ионов металла- кофактора и также оказывает влияние на эффективность каталитической реакции. Замена остатка R336 приводит к значительной дестабилизации структуры белковой глобулы и полной потере каталитической активности фермента. Полученные данные позволили установить молекулярные причины влияния замен R336Q, H342A и D345E на эффективность каталитического присоединения dNTP к ДНК- праймеру. Функциональное картирование активного центра нуклеотидилтрансфераз в перспективе может быть использовано для проведения рационального дизайна мутантных форм фермента, востребованных для реализации молекулярно- биологических и биотехнологических приложений.

Сенчурова, С.И. КООРДИНАЦИЯ НУКЛЕОЗИДТРИФОСФАТОВ В АКТИВНОМ ЦЕНТРЕ ТЕРМИНАЛЬНОЙ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕОТИДИЛТРАНСФЕРАЗЫ ЧЕЛОВЕКА ПРИ МАТРИЦА- НЕЗАВИСИМОМ СИНТЕЗЕ ДНК / С.И. Сенчурова, Т.Е. Тюгашев, Н.А. Кузнецов // Биохимия .— 2026 .— №1 .— С. 116-133 .— URL: https://rucont.ru/efd/957454 (дата обращения: 14.08.2026)