Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Оренбургский государственный университет Е. С. Алешина, Е. А. Дроздова, Н. А. Романенко КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ КАК ОСНОВА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА Рекомендовано ученым советом федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Оренбургский государственный университет» в качестве учебного пособия для студентов, обучающихся по программам высшего образования по направлениям подготовки 06.03.01 Биология Оренбург 2017 УДК 579.22(075.8) ББК 28.4я73 А49 Рецензент – доктор биологических наук, доцент Г.В. Карпова А49 Алешина, Е. С. Культивирование микроорганизмов как основа биотехнологического процесса : учебное пособие / Е. С. Алешина, Е. А. Дроздова, Н. А. Романенко, Оренбургский гос. ун-т. <...> 52 2.3 Регенерация клеточной стенки и реверсия к клеточным формам . <...> 55 2.4 Тестовые задания по разделу «Методы получения протопластов микроорганизмов» . <...> 140 4 4.6 Тестовые задания к разделу «Субстраты для культивирования биообъектов» . <...> Все известные процессы культивирования микроорганизмов, а их достаточно много, различаются по таким параметрам как состояние питательной среды (в этом случае культивирование носит поверхностный или глубинный характер), наличие или отсутствие перемешивания (динамические или статические культуры), содержание кислорода (аэробное или анаэробное культивирование), способ действия (закрытые системы, включающие в основном периодические, и открытые, включающие непрерывные культуры), количество ферментеров (в этом случае процессы могут быть одно-, дву- и многостадийные) и способ управления (культивирование хемостатное, турбидостатное, оксистатное, рН-статное и другие). <...> Т. е. периодическая культура – популяция клеток в ограниченном жизненном пространстве. <...> Вместе с тем выращивание микроорганизмов на твердых <...>
Культивирование_микроорганизмов_как_основа_биотехнологического_процесса.pdf
УДК 579.22(075.8)
ББК 28.4я73
А49
Рецензент – доктор биологических наук, доцент Г.В. Карпова
А49
Алешина, Е. С.
Культивирование микроорганизмов как основа биотехнологического
процесса : учебное пособие / Е. С. Алешина, Е. А. Дроздова, Н. А.
Романенко, Оренбургский гос. ун-т. – Оренбург : ООО ИПК
«Университет», 2017. – 191 с.
ISBN 978-5-7410-1658-9
Учебное пособие рекомендовано для студентов медицинских и
биологических специальностей при изучении дисциплин «Промышленная
микробиология с основами физиологии микроорганизмов», «Введение в
биотехнологию»,
«Биохимия
биотехнологических процессов»,
«Микробиология, вирусология и иммунология», также может быть
использовано в качестве основной литературы при написании курсовой
работы и в качестве справочного материала при выполнении
экспериментальной части дипломного проекта.
В учебном пособии представлены сведения о культивировании
микроорганизмов, устойчивости микроорганизмов во внешней среде, влиянии
различных факторов среды на рост и развитие микроорганизмов.
Учебное пособие соответствует требованиям ФГОС ВПО по
направлению подготовки 06.03.01 Биология, обеспечивая освоение
следующих общепрофессиональных компетенций: способность понимать
базовые представления о разнообразии биологических объектов, значение
биоразнообразия для устойчивости биосферы, способность использовать
методы наблюдения, описания, идентификации, классификации,
культивирования биологических объектов (ОПК-3); способность применять
базовые представления об основах общей, системной и прикладной экологии,
принципы оптимального природоиспользования и охраны природы,
мониторинга, оценки состояния природной среды и охраны живой природы
(ОПК-10); способность применять современные представления об основах
биотехнологических и биомедицинских производств, генной инженерии,
нанобиотехнологии, молекулярного моделирования (ОПК-11); способность
использовать знание основ и принципов биоэтики в профессиональной и
социальной деятельности (ОПК-12).
УДК 579.22(075.8)
ББК 28.4я73
ISBN 978-5-7410-1658-9
© Алешина Е.С.,
Дроздова Е.А.,
Романенко Н.А.,2017
© ОГУ, 2017
2
Стр.2
Содержание
Введение ............................................................................................................................... 6
1 Культивирование клеток микроорганизмов .................................................................. 7
1.1 Классификация процессов культивирования .......................................................... 9
1.2 Получение накопительных и чистых культур ...................................................... 10
1.3 Методы культивирования на твердых средах. Массовая культура на твердой
поверхности .................................................................................................................... 13
1.4 Периодическое культивирование ........................................................................... 15
1.4.1 Глубинное периодическое культивирование ................................................. 25
1.4.2 Продленное периодическое культивирование ............................................... 26
1.5 Многоциклическое культивирование .................................................................... 28
1.6 Полунепрерывное культивирование ...................................................................... 29
1.7 Непрерывное культивирование .............................................................................. 29
1.7.1 Гомогенные системы идеального смешения .................................................. 30
1.7.2 Системы культивирования полного вытеснения ........................................... 34
1.7.3 Системы твердожидкостного типа .................................................................. 35
1.8 Синхронно делящиеся культуры микроорганизмов ............................................ 36
1.8.1 Периодическое синхронное культивирование ............................................... 38
1.8.2 Непрерывно-синхронное культивирование .................................................... 40
1.9 Тестовые задания к разделу «Культивирование клеток микроорганизмов» ..... 41
2 Методы получения протопластов микроорганизмов ................................................. 49
2.1 Получение протопластов у бактерий ..................................................................... 49
2.2 Получение протопластов у грибов ......................................................................... 52
2.3 Регенерация клеточной стенки и реверсия к клеточным формам ...................... 54
2.3.1 Реверсия бактериальных протопластов .......................................................... 55
2.3.2 Реверсия протопластов мицелиальных грибов .............................................. 55
2.4 Тестовые задания по разделу «Методы получения протопластов
микроорганизмов» ......................................................................................................... 56
3 Параметры роста ............................................................................................................. 59
3.1 Скорость роста ......................................................................................................... 59
3
Стр.3
3.1.1 Удельная скорость роста .................................................................................. 59
3.1.2 Время удвоения биомассы ................................................................................ 61
3.1.3 Степень размножения ....................................................................................... 61
3.1.4 Обратное время удвоения ................................................................................. 61
3.2 Справедливость закона экспоненциального роста ............................................... 62
3.3 Экономический коэффициент ................................................................................ 63
3.4 Метаболический коэффициент ............................................................................... 64
3.5 Влияние концентрации субстрата на скорость роста ........................................... 64
3.6 Значения константы насыщения Ks ....................................................................... 66
3.7 Определение длительности лаг-периода ............................................................... 69
3.8 Предельные границы максимальной концентрации биомассы .......................... 69
3.9 Определение биомассы ........................................................................................... 71
3.9.1 Измерение массы и объема ............................................................................... 72
3.9.2 Экономические эффекты .................................................................................. 75
3.9.3 Скорость метаболических процессов .............................................................. 75
3.9.4 Метод светорассеяния ....................................................................................... 75
3.9.5 Подсчет клеток и органелл ............................................................................... 78
3.9.6 Методы окрашивания ........................................................................................ 79
3.10 Тестовые задания по разделу «Параметры роста» ............................................. 79
4 Субстраты для культивирования биообъектов ........................................................... 85
4.1 Принципы составления питательных сред ............................................................ 85
4.2 Типы питания микроорганизмов ............................................................................ 96
4.3 Потребность микроорганизмов в химических элементах ................................. 102
4.4 Питательные среды ................................................................................................ 113
4.4.1 История открытия питательных сред ............................................................ 113
4.4.2 Требования, предъявляемые к средам ........................................................... 114
4.4.3 Этапы приготовления сред ............................................................................. 116
4.4.4 Классификация питательных сред ................................................................. 122
4.5 Культивирование грибов ....................................................................................... 140
4
Стр.4
4.6 Тестовые задания к разделу «Субстраты для культивирования
биообъектов» ................................................................................................................ 141
5 Факторы, влияющие на рост и размножение микроорганизмов ............................. 157
5.1 Физические факторы, оказывающие влияние на рост и размножение
микроорганизмов ......................................................................................................... 158
5.2 Химические факторы, оказывающие влияние на рост и размножение
микроорганизмов ......................................................................................................... 169
5.3 Биологические факторы, оказывающие влияние на рост и размножение
микроорганизмов ......................................................................................................... 175
5.4 Антибиотики ........................................................................................................... 178
5.5 Пробиотики ............................................................................................................. 180
5.6 Бактериофаги .......................................................................................................... 180
5.7 Тестовые задания к разделу «Факторы, влияющие на рост и размножение
микроорганизмов» ....................................................................................................... 182
Список использованных источников ............................................................................ 189
5
Стр.5