ТРАНСКРИПТОМИКА УДК 577.21 СКАНИРОВАНИЕ МУТАЦИЙ KRAS, NRAS, BRAF И PIK3CA МЕТОДОМ ПЛАВЛЕНИЯ ДНК C ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЗОНДОВ TaqMan © 2017 г. И. В. Ботезату, И. О. Панчук, А. М. Строганова, А. И. Сендерович, В. Н. Кондратова, В. П. Шелепов, А. В. Лихтенштейн* Научно-исследовательский институт канцерогенеза Российского онкологического научного центра им. <...> Н.Н. Блохина Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, 115478 Россия *e-mail: alicht@mail.ru Поступила в редакцию 14.01.2016 г. Принята к печати 12.02.2016 г. Метод мутационного сканирования посредством плавления ДНК (DNA Melting Analysis, DMA) основан на использовании асимметричной ПЦР и последующего плавления дуплексов однонитевых ампликонов с зондами TaqMan. <...> По основным параметрам: простота исполнения, высокая производительность и чувствительность – метод оптимально подходит для применения в клинической генодиагностике. <...> Предел обнаружения мутантных аллелей методом DMA составляет приблизительно 3%, что намного выше чувствительности секвенирования по Сэнгеру. <...> Кроме того, метод DMA реализуется в “закрытом формате”: 2-часовой анализ проводят в одной пробирке без каких-либо промежуточных или дополнительных процедур, что сводит к минимуму риск перекрестного загрязнения образцов. <...> Апробация метода DMA проведена сканированием мутаций клинически значимых генов KRAS, NRAS, BRAF и PIK3CA в 324 образцах ДНК из опухолей больных меланомой, раком толстой кишки и раком легкого. <...> ДНК выделяли или непосредственно из опухолевой ткани или из опухолевой ткани, фиксированной формальдегидом и заключенной в парафиновые блоки. <...> Спектры мутаций, выявленные в каждом типе опухолей, соответствуют данным литературы и, тем самым, валидизируют применение DMA. <...> Ключевые слова: ПЦР, сканирование мутаций, плавление ДНК, зонды TaqMan, мультиплексный анализ, KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA DOI: 10.7868/S0026898417010062 ВВЕДЕНИЕ Основная тенденция современной клинической онкологии – персонализированная терапия рака [1, 2]. <...> Их число со временем, несомненно, будет расти <...>