ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНЫХ 3-ГЕКСУЛОЗО-6-ФОСФАТСИНТАЗ У ГАЛОТОЛЕРАНТНОГО МЕТАНОТРОФА Methylomicrobium alcaliphilum 20Z (200,00 руб.)

290 – 300 УДК 577.154 ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНЫХ 3ГЕКСУЛОЗО6ФОСФАТСИНТАЗ У ГАЛОТОЛЕРАНТНОГО МЕТАНОТРОФА Methylomicrobium alcaliphilum 20Z* © 2017 О. <...> Г.К. Скрябина РАН, 142290 Пущино, Московской обл., Россия 2 Пущинский государственный естественнонаучный институт, 142290 Пущино Московской обл., Россия; электронная почта: khmelenina@rambler.ru Поступила в редакцию 12.09.16 После доработки 18.10.16 У аэробного метанотрофа Methylomicrobium alcaliphilum 20Z ключевые ферменты рибулозомонофосфатного (РМФ) цикла ассимиляции углерода, 3гексулозо6фосфатсинтаза (HPS) и 6фосфо3гексулозоизомера за (PHI), кодируются генами hps, phi и фьюженом hpsphi. <...> Рекомбинантные HPSHis6, PHIHis6 и двудомен ный белок HPSPHI получены гетерологичной экспрессией в Escherichia coli и очисткой аффинной хрома тографией. <...> В присутствии PHIHis6, HPSHis6 (2 Ч 20 кДа) и HPSPHI (2 Ч 40 кДа) катализировали образо вание фруктозо6фосфата из формальдегида и рибулозо5фосфата с активностями 172 и 22 Е/мг белка со ответственно. <...> Судя по значениям kcat/Km, HPS проявляла более высокую каталитическую эффективность, но меньшее сродство к формальдегиду по сравнению с HPSPHI. <...> AMP и ADP существенно ингибировали активность обеих гексулозофосфатсинтаз. <...> Двудоменный белок HPSPHI не обладал активностью изомера зы, но полипептиды, соответствующие его HPS и PHI регионам, экспрессированные раздельно, проявляли соответствующие синтазную и изомеразную активности. <...> Инактивация слитого гена hpsphi не выявила фе нотипических различий между мутантным и исходным штаммами M. alcaliphilum. <...> Анализом аннотирован ных геномов обнаружены гены hps и phi у всех метилотрофов с РМФ путем С1ассимиляции, тогда как сли тый ген hpsphi присутствует только у некоторых метанотрофов, но не найден у нерастущих на метане мети лобактерий. <...> Обсуждается значение этих тандемов в адаптивном и биотехнологическом потенциале мети лотрофов. <...> КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: метилотрофные бактерии, метанотрофы, Methylomicrobium alcaliphilum 20Z, 3гексу лозо6фосфат синтаза и 6фосфо 3гексулозоизомераза <...>