1, 3 ФеРМентАтИвнЫЙ МетОд снИЖенИЯ РеАКтОГеннОстИ лИПОПОлИсАХАРИднЫХ ПРИМесеЙ в ПРеПАРАтАХ вАКцИннЫХ БелКОв нА ПРИМеРе ПОлУЧенИЯ БелКА-АдЪЮвАнтА CRM197 1 Московская обл., Россия; 2 3ОАО «Институт инженерной иммунологии», 142380, пос. <...> Любучаны, Московская обл., Россия Одна из проблем очистки рекомбинантных белков, в частности компонентов вакцин, — удаление примесей эндотоксинов (пирогенного липополисахарида, ЛПС). <...> Перспективным подходом к детоксификации таких белковых препаратов может стать ферментативная конверсия ЛПС в нетоксичный и обладающий адъювантными свойствами монофосфорил-липид А (МФЛА) под действием липид-A фосфатазы LpxE. <...> Цель данной работы — исследовать возможность применения рекомбинантной липид-A фосфатазы LpxE Francisella tularensis для снижения реактогенности рекомбинантного CRM197, белкового носителя для синтеза конъюгированных вакцин. <...> Сконструирован штамм-продуцент белка CRM197 в Escherichia coli и разработана методика очистки белка CRM197 из телец включения, предусматривающая выделение белка на тандемной системе ионообменных колонок CM- и Q-Sepharose, рефолдинг и финальную доочистку на керамическом гидроксиапатите (ГАП). <...> Полученный препарат рекомбинантного белка CRM197 обладал чистотой 98%, по данным электрофореза и денситометрии, и содержанием эндотоксина 500 ME/мг, по данным ЛАЛ-теста. <...> С использованием кроличьего теста и методом ИФА на модели продукции провоспалительных цитокинов IL-1β, IL-6, IL-10 и TNFα дендритными клетками мыши под действием бактериального ЛПС показано, что обработка препарата белка CRM197 рекомбинантной липид-1а-фосфатазой LpxE F. tularensis нейтрализует пирогенность и реактогенность белкового препарата. <...> Полученные данные позволяют рассматривать ферментативную обработку фосфатазой LpxE в качестве перспективной стратегии снижения реактогенности синтезированных в E. coli рекомбинантных белков, используемых для промышленного производства вакцин. <...> Ключевые слов а: рекомбинантные белки; конъюгированные <...>