2015.4.458rus ИЗУЧЕНИЕ УСЛОВИЙ ЭФФЕКТИВНОГО ВВЕДЕНИЯ ТРАНСГЕНОВ В ЭМБРИОНАЛЬНЫЕ КЛЕТКИ КУР С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЛЕНТИВИРУСНОЙ ВЕКТОРНОЙ СИСТЕМЫ Н.А. <...> ЗИНОВЬЕВА1 Перенос генов, опосредованный ретровирусными и лентивирусными векторами, рассматривается в качестве одного из перспективных способов генетической модификации сельскохозяйственной птицы (S.C. <...> Однако эффективность трансгенеза эмбриональных клеток кур рекомбинантными ретровирусами и лентивирусами лимитируется рядом факторов. <...> Одной из проблем при получении трансгенной птицы остается наличие большого числа эмбриональных клеток (порядка 60000-100000) на начальном этапе инкубации и необходимость применять высококонцентрированные вирусные препараты (около 109 вирусных частиц/мл) для достижения относительно приемлемой эффективности введения трансгенов. <...> Целью настоящей работы стало получение вектора на основе модифицированной лентивирусной системы второго поколения и определение оптимальных условий использования лентивирусных векторов для трансгенеза эмбрионов кур. <...> В состав векторной системы входили три различные плазмиды: psPAX2, содержащая гены лярного стоматита (VVS-G), и pWPXL — самоинактивирующийся лентивирусный вектор, несущий ген ; pLPG, кодирующая поверхностный гликопротеин G вируса везику(enhanced green fluorescence protein) под контролем промотора гена фактора элонгации 1 РНК-полимеразы II человека ( ). <...> Для получения рекомбинантного вируса и определения титров использовали линию клеток человека 293T. <...> Введение вирусного препарата в куриные эмбрионы проводили в разные сроки после начала инкубации: через 2024 ч (I группа) и через 50-55 ч (II группа). <...> Эффективность трансформации и число интегрированных копий трансгена оценивали методом real-time PCR (RT-PCR) анализа ДНК, выделенной из эмбрионов на 7-е сут инкубации, на наличие . <...> Максимальные титры вирусных препаратов были получены при количественном соотношении плазмид psPAX2, pLPG и pWCAG 1:1:3 и составили 2,4½107 КОЕ/мл до ультрацентрифугирования <...>