Национальный цифровой ресурс Руконт - межотраслевая электронная библиотека (ЭБС) на базе технологии Контекстум (всего произведений: 635212)
Контекстум
Руконтекст антиплагиат система
Клиническая лабораторная диагностика  / №9 2015

Диагностика коклюша методом ПЦР, результаты клинической апробации. (250,00 руб.)

0   0
Первый авторЯцышина
АвторыПрадед М.Н., Селезнева Т.C., Воробьева Н.С., Малинина С.В., Любимова Т.Е., Наумова Л.А., Козыренко Т.Т., Королева Л.В., Лазарова Т.Т., Гречанинова Т.А., Забалуева Г.В., Демакова Т.В., Григорьева Н.С., Юферова М.А., Лямина В.С., Сушкова Л.Н., Блиман И.Б., Зверякина Н.Н., Жирнова Л.Ю.
Страниц2
ID397016
АннотацияРанняя диагностика коклюша позволяет своевременно использовать этиотропную терапию, эффективную лишь в катаральный период болезни. Бактериологическое исследование обладает высокой специфичностью, но по диагностической чувствительности не превышает 10–20% по сравнению с клиническим диагнозом. В протоколах ВОЗ и CDC в качестве альтернативного метода рекомендуется полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяющая выявить ДНК возбудителя в биологическом материале с первых дней и до месяца от начала болезни.
Диагностика коклюша методом ПЦР, результаты клинической апробации. / С.Б. Яцышина [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика .— 2015 .— №9 .— С. 80-81 .— URL: https://rucont.ru/efd/397016 (дата обращения: 11.05.2024)

Предпросмотр (выдержки из произведения)

Чистую культуру возбудителей брали с поверхности твердой питательной среды бактериологической петлей (d=1 мм) и помещали в пластиковую одноразовую пробирку с крышкой и замком, содержащую 300 мкл физиологического раствора. <...> Если тестирование бактерийной массы откладывалось на неопределенное время, пробирки замораживали при −20 °C до использования. <...> Затем взвесь центрифугировали при 12 000 об/мин в течение 30 с, добавляли краситель для электрофоретической детекции (НПФ «Литех») в объеме 0,5 мкл на пробу. <...> Забирали около 20 мкл супернатанта, который заливали в лунку размером 4 Ч 1 мм 1,2% агарозного геля, приготовленного в 20 мл ТАЕ-буфера с предварительно добавленными в гель 10 мкл 1% бромистого этидия. <...> Для оценки структуры электрофореграмм ДНК использовали стандартный ДНКмаркер 1 kb, состоящий из 13 фрагментов ДНК в диапазоне 250−10 000 bp (ООО «Лаборатория МЕДИГЕН», г. Новосибирск). <...> ДНК-маркер в количестве 3 мкл заливали в отдельную лунку геля. <...> Проводили горизонтальный электрофорез в течение 15–20 мин, контролируя его длительность визуально по движению полосы красителя, которая должна пройти от лунки примерно 1,5 см. После электрофореза гель помещали на стекло УФ-трансиллюминатора и анализировали результат в проходящем ультрафиолетовом свете с длиной волны 310 нм. <...> Были исследованы 57 культур музейных и клинических штаммов P. аeruginosa (пигментообразующих и беспигментных) и 65 изолятов энтеробактерий (цитробактеров, энтеробактеров, клебсиелл, протеев, кишечной палочки), стафилококков, энтерококков и ацинетобактерий. <...> После электрофореза проб синегнойной палочки установлено наличие трех светящихся в УФ горизонтальных полос на электрофореграммах – рядом с лункой, что соответствовало фрагментам ДНК-маркера размером около 10 000 bp, недалеко от лунки, что соответствовало фрагментам ДНК-маркера размером 6000–8000 bp и на конце трека, где возникало оптическое уплотнение, которое мы назвали «метелкой», что соответствовало фрагментам <...>