РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Наиболее интересные для исследования геныкандидаты (vif, tat, pol, gag) использованы для создания молекулярных клонов на основе рекомбинатных конструкций. <...> Для достижения поставленной цели проведен анализ плазмид, необходимых для наработки в препаративных концентрациях определенных генов ЛМЖ, изучены их рестрикционные карты для подбора оптимальных рестриктаз. <...> При проведении данной работы выбраны плазмидыpGEM и pTZ57R с Т7 промоутером и выбрана плазмида, в которой будет проходить дальнейшая экспрессия синтетических белков – pEGFP-N1. <...> В качестве рестриктаз, сайты которых не было найдено в изучаемых генах, но входили в мультиклонировочный сайт выбранных плазмид, выбраны AfeI, KpnI, SalI, XhoI, Acc65I, BglI. <...> Специфические ПЦР-продукты амплифицировали на приборе PalmCycler (CorbettResearch, Австралия) со следующим температурным режимом: денатурация 94 ºС – 2 мин, 35 циклов: 94 ºС – 30 с, 50 ºС – 60 с, 68 ºС – 2 мин и заключительной элонгациейпри 68 ºС – 5 мин. <...> Что соответствует инструкции по применению полимеразы OneTaqHotStartDNA (NEB, США). <...> После проведения электрофореза ПЦРпродукт очищали от агарозного геля с помощью Silicaspin колонок (Qiagen, Германия). <...> Реакцию лигирования проводили в области мультиклонировочного сайта с использованием 5 ед. акт. <...> Трансфекцию осуществляли в клетки E.coli штамма DH5α (Promega, США) методом термошока. <...> В результате скрининга нами были получены рекомбинантныеплазмидысо встроеннымиvif-, tat-, pol-, gag-генами. <...> Для последующего анализа первичной последовательности амплифицируемых ПЦРпродуктов использовали реакцию рестрикции по заданным сайтам и метод нуклеотидного секвенирования. <...> Создана библиотека клонов ВЫВОДЫ После проведения нуклеотидного секвенирования всех полученных рекомбинантных клонов и анализа полученных последовательностей выявлено наличие вариабельности не только внутри отдельных представителей одного вида вирусного агента, но и среди рекомбинантных клонов, полученных от одного штамма возбудителя <...>