№ 2 УДК 577.15.1 ЭКСПРЕССИЯ И ХАРАКТЕРИСТИКА МУТАНТНЫХ ФОРМ ПЕНИЦИЛЛИНАЦИЛАЗЫ ИЗ Alcaligenes faecalis А. <...> Тишков1,2,3* (1кафедра химической энзимологии химического факультета МГУ, 2ООО «Инновации и высокие технологии МГУ», 3Институт биохимии им. <...> А.Н.Баха РАН; e-mail: vitishkov@gmail.com) Секвенирование шести плазмид с геном пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis VKM B1518 (AfПА) показало наличие в гене случайных мутаций, возникших при проведении полимеразной цепной реакции. <...> Проведена экспрессия в клетках E. coli шести мутантных AfПА и фермента дикого типа. <...> Анализ активности мутантных AfПА в клетках E. coli свидетельствует о влиянии ряда аминокислотных замен на уровень экспрессии гена AfПА, а также на скорость роста клеток. <...> Очищены четыре мутантных AfПА, изучены их каталитические свойства и температурная стабильность. <...> Показано, что исследованные аминокислотные замены не влияют на величину каталитической эффективности. <...> Замены βQ133R и βK184E (мутант AfПА М2) на термостабильность фермента в пределах ошибки эксперимента не влияли, а в случае мутантов AfПА М4 (βY90H), М5 (αD132G, βR97C) и М6 (αV5E, αN183S и βE439G) константа скорости инактивации по сравнению с ферментом дикого типа увеличилась в 2,4, 2,75 и 8,3 раза соответственно. <...> Пенициллинацилаза G (ПА, КФ 3.5.1.11) катализирует реакцию гидролиза пенициллина G до фенилуксусной и 6-аминопенициллановой кислоты. <...> ПА принадлежит к суперсемейству гидролаз с N-концевым нуклеофилом и содержит каталитический остаток серина на N-конце β-субъединицы. <...> ПА (в основном фермент из E. coli) используется в промышленности для получения полусинтетических β-лактамных антибиотиков. <...> Среди перечисленных пенициллинацилаз G большой интерес как с практической, так и с фундаментальной точки зрения представляет фермент из бактерии Alcaligenes faecalis. <...> По сравнению с ПА из E. coli он обладает более высокой термостабильностью [2] и широким pH-профилем активности [3, 10, 11], а также характеризуется наивысшей каталитической эффективностью по отношению к бензилпенициллину <...>