98 УДК 577.1 577.15 ИЗМЕНЕНИЕ ВЕЛИЧИНЫ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ТОЧКИ ФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ МЕТОДОМ РАЦИОНАЛЬНОГО ДИЗАЙНА А.А. <...> А.Н. Баха РАН; 2кафедра энзимологии химического факультета МГУ; 3ООО «Инновации и высокие технологии МГУ; *e-mail: vitishkov@gmail.com ) Для расширения рН-оптимума стабильности NAD+-зависимой формиатдегидрогеназы (ФДГ, КФ 1.2.1.2) из бактерии Pseudomonas sp. <...> 101 (PseФДГ) методом направленного мутагенеза получены четыре мутантных фермента с заменами Lys112Pro, Lys231Ala, Lys231Ser и Lys317Asn. <...> Выбор положений и типа аминокислоты для замены был сделан на основе выравнивания аминокислотных последовательностей ФДГ из разных источников, а также анализа трехмерной структуры PseФДГ. <...> Для всех полученных мутантных форм проведено изучение кинетических свойств и температурной стабильности. <...> Показано, что замены в положениях 112 и 231 приводят к небольшому улучшению кинетических свойств, в то время как для мутанта Lys317Asn наблюдалось снижение сродства к коферменту. <...> Изучение температурной стабильности полученных ферментов показало, что замены в положениях 112 и 231 приводят лишь к небольшой дестабилизации фермента, а замена Lys317Asn вызывает значительную потерю в термостабильности. <...> Для всех полученных мутантных форм наблюдалось снижение изоэлектрической точки примерно на 0,1 единицу. <...> NAD+-зависимая формиатдегидрогеназа (ФДГ; КФ 1.2.1.2) катализирует реакцию окисления формиат-иона до углекислого газа при сопряженном восстановлении NAD+ до NADH: NAD+ + HCOO– → NADH + CO2. <...> Этот фермент представляет большой научный и практический интерес. <...> ФДГ используется для регенерации NADH в процессах хирального синтеза с участием NAD(P)+-зависимых оксидоредуктаз. <...> Исследуемый в нашей лаборатории фермент из метилотрофной бактерии Pseudomonas sp. <...> Все эти данные позволяют проводить систематические исследования взаимосвязи структуры и свойств фермента, а также эксперименты по белковой инженерии. <...> Так, для PseFDH получены мутантные формы c заменой остатка Cys255, обладающие повышенной химической <...>