Смирнова, М.И. Кокшаров, И.Н. Зоров, Н.Н. Угарова (кафедра химической энзимологии химического факультета МГУ; е-mail: S_mir_nova@mail.ru) Cконструированы плазмиды, кодирующие гены гибридных белков термостабильного мутанта (TS) люциферазы cветляков Luciola mingrelica (Luc) cо стрептавидином (SA) и полигистидиновой последовательностью (His6) на N- или С-конце белка: SA-Luc-His6, His6-SA-Luc, Luc-SA-His6. <...> Гибридные белки наработаны, очищены, изучены их состав, люциферазная активность, термостабильность, спектры биолюминесценции и способность связывать биотин. <...> Введение стрептавидина не влияет на спектры биолюминесценции, но при 47°С уменьшает термостабильность вдвое. <...> Методом эксклюзионной хроматографии показано, что в зависимости от структуры плазмиды гибридные белки экспрессируются в виде димеров, тетрамеров и более высокомолекулярных олигомеров, которые отличаются по люциферазной активности и способности связывать биотин. <...> Наиболее оптимальными свойствами обладает гибридный белок His6-SA-Luc. <...> Ключевые слова: люцифераза светляков, Luciola mingrelica, гибридный белок, стрептавидин, олигомерные формы. имодействия (Кд = 10–15 М) широко используются в разных областях биохимии и молекулярной биолоБиотин-стрептавидиновые высоко аффинные взагии. <...> На их основе создано множество биоаналитических реагентов, где комплекс биотин-стрептавидин выступает в качестве мостика между изучаемыми молекулами. <...> Гибридные белки, содержащие стрептавидин, получают как химической конъюгацией, так и генно-инженерным путем, причем последний способ является приоритетным, поскольку химическая конъюгация не всегда позволяет воспроизводимо получать гибриды строго определенной стехиометрии. <...> Это открывает возможности использования таких белков в биоаналитических системах [5]. <...> Для акворина были получены коньюгаты со стрептавидином химическим путем [6]. <...> Гибридный белок акворин-стрептавидин в клетках E. coli экспрессировался в виде телец включения, что требует проведения процедуры <...>